質(zhì)粒(Plasmid)—— 基因工程中最常見(jiàn)的運(yùn)載體。是一種相對(duì)分子質(zhì)量較小、獨(dú)立于染色體DNA之外的環(huán)狀DNA。
質(zhì)粒載體是在天然質(zhì)粒的基礎(chǔ)上為適應(yīng)實(shí)驗(yàn)室操作而進(jìn)行人工構(gòu)建的質(zhì)粒。與天然質(zhì)粒相比,質(zhì)粒載體通常帶有一個(gè)或一個(gè)以上的選擇性標(biāo)記基因(如抗生素抗性基因)和一個(gè)人工合成的含有多個(gè)限制性內(nèi)切酶識(shí)別位點(diǎn)的多克隆位點(diǎn)序列,并去掉了大部分非必需序列,使分子量盡可能減少,以便于基因工程操作。
大量獲取質(zhì)粒可以通過(guò)質(zhì)粒擴(kuò)增的方式,其方法通常包括將細(xì)菌質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到大腸桿菌(感受態(tài))中,然后借助大腸桿菌的搖菌擴(kuò)增實(shí)現(xiàn)質(zhì)粒的擴(kuò)增,再通過(guò)抽提的方式收獲大量質(zhì)粒。質(zhì)粒擴(kuò)增需要的源頭質(zhì)粒量非常小,1ug的質(zhì)粒已經(jīng)能夠滿足擴(kuò)增的需要,這也使得質(zhì)粒的重復(fù)使用變得非常容易,因此質(zhì)粒發(fā)貨后無(wú)序列問(wèn)題不退不換。

質(zhì)粒DNA示意圖